簡介

盡管（guǎn）存在解剖和生理上的差異，小鼠在研究人類肺部疾（jí）病（bìng），包括急性肺損傷（ALI）和肺纖維化方（fāng）麵仍具有極高的（de）價值（zhí）。治療方法是諸多肺部疾病研究的核心，其中口（kǒu）咽（yān）吸入法（OPA）已被廣泛用，但其缺點是部分藥劑可能被吞（tūn）入胃腸道，從而導致給藥劑量的不準確；另一種是經氣管給藥，這涉及到在深度麻醉狀態下切開氣管直接將藥物注入（rù）到呼吸道，然而，這種操作不僅因其侵入（rù）性和造成呼吸道損傷（shāng）而不可取（qǔ），還存在耗時過（guò）長，且（qiě）操作者需要大量的訓練等（děng）問題。

1999年，Brown等人發表研究論文（wén）描述了（le）一（yī）種小鼠肺部直接插管的方法，後續也有其他幾篇論文（wén）描述（shù）了不同的小鼠肺部插管方法，但這種插管的主要問（wèn）題（tí）是：當插管導管接近氣管並準備插入時，導管本身會阻擋（dǎng）光線，從而無法看清需要插入的位置（zhì）。

本文展示了如何簡單、低成（chéng）本地消除這個可視化問題（tí），從而確保在相對少的培訓或經驗下成功進行插管。

方法

準備：

1、導管。對於20-35 g小鼠的插管，我們（men）使用1或1.5英寸長，20 g IV導管(BD Insylte, Sparks, MD或Jelco Optiva, Carlsbad, CA)。可以為每（měi）隻小（xiǎo）鼠使用新的無菌導管，但導管也（yě）可以在消毒（dú）後用（yòng）70%乙醇（chún）浸泡過夜重複使用。盡管小（xiǎo）鼠的咽部和氣管不是無菌的，但（dàn）應遵循適當的清潔程序，包括使用無菌（jun1）手套和器械。

2、光纖電纜。我（wǒ）們使用約70厘（lí）米長、0.5毫米粗（cū）的（de）Edmund Optics光纜，但長度不是決定性的（de）因素。重要的是要確保纖（xiān）維的邊緣是平滑的，因為在用剃（tì）刀切割（gē）電纜後（hòu），邊緣相（xiàng）對較銳利，很容易刺穿氣管壁。然而隻需將光纖端部放在1000粒度（dù）的砂紙上，就可以非常容易（yì）地打磨（mó）平這個邊緣。另一端插（chā）入（rù）橡（xiàng）膠塞（sāi）中（zhōng）。最簡便的方法是先用18號針通過橡膠塞，插入光纖通過針孔，然後撤出針。橡膠塞連接150瓦鹵素光源（yuán）。重（chóng）要的是要確保使用矽膠橡膠塞(或（huò）其他耐熱材（cái）料)，因為普（pǔ）通（tōng）橡膠或軟木在靠近熱光源時可能會燃燒。

插管：

1、參見圖1和2。通過一段短矽橡膠管(ID≈0.8 mm×OD 4mm, Cole-Palmer, EW-96410-13)插入光纖電纜（lǎn）。將這個橡膠管係（xì）緊，同時仍然允（yǔn）許調整光纖電纜。將矽膠管緊密地插入套管的魯爾（ěr）端，固定光纖電纜在套管內的位置（zhì）。調整光纖電纜的位置，使其在套管尖端前方約4毫米處穿過套管。

圖1.如圖所示，光（guāng）纜插入矽橡（xiàng）膠塞（sāi）中，與其（qí）相對的另（lìng）一端緊綁著一小段矽橡（xiàng）膠管。

圖2.圖片展示了橡膠塞與光源的（de）連接，光纖的（de）另一端穿過插管（guǎn）導管。左側還展示了（le）一個簡單的（de）支架，用於在插管過程（chéng）中固定小鼠。

2、將麻醉後的（de）小鼠（shǔ）放置在垂直支架（jià）上，由其上切牙（yá）懸掛(圖3)。大多數研究者發現，當（dāng）小鼠的腹側麵向自己時，視覺效果最佳。非常輕（qīng）柔地拔出（chū）舌頭，用拇指和食指握住。中（zhōng）指放在（zài）頸部和塑料支架（jià）之間。利用（yòng）食指和拇指對舌頭的牽引開（kāi）啟口腔，並用頸部後（hòu）方的（de）中指調整頭部的角度，使插管（guǎn）路徑伸直，如圖3所示。

圖3.兩（liǎng）個視（shì）角展示了準備插管的（de）小鼠位置

3、使（shǐ）用光（guāng）纖電纜作為光（guāng）源和導入器（qì），推動它通過可視化聲帶。如果看不到聲帶，可（kě）以通過中指作為支點，輕輕用力拉（lā）舌頭。插入後，將套管再向前推進（jìn）約5 mm。然後，小心不要（yào）移動（dòng）套管，拔出光纖電纜。將小鼠平躺下來（lái），用膠帶固定導管，並用橡皮泥(塑型黏土（tǔ）)支撐導管接頭，如（rú）圖4所示。

圖4。此圖展示了一隻準備通氣的已插管小鼠。圍繞嘴部的膠帶有助於防（fáng）止導管移動。一小塊橡皮泥(建模黏土)提供了（le）一個便（biàn）利的支撐點，用（yòng）於固定導管接頭與呼吸機（jī）的連接。

4、步驟3中的操作不容易（yì）演示或教學，因為這是一（yī）個（gè）單獨的操作（zuò）。然（rán）而，通過對舌頭的牽引力和頭部後麵的支撐的微妙調整，幾乎所有（yǒu）嚐試這種（zhǒng）方法的人都會很快找到正（zhèng）確的方式來調整小鼠的位置，使聲帶可視（shì）化。

總結（jié）

本文描述的方法（fǎ）有幾個優點。首（shǒu）先，裝置簡（jiǎn）單且價（jià）格低廉。製作裝（zhuāng）置不需要任何特殊工（gōng）具或昂貴的設備。在實（shí）踐中，對於從未嚐（cháng）試過插管（guǎn）的研究員、學生（shēng）和技術人（rén）員來說更容易掌握。

在進行插管（guǎn）時（shí），有幾個實際問題需要提及。在最初打開小鼠口腔時，盡量輕（qīng）柔拉舌頭非常重要。如果使用無保護鉗，很容易損傷舌頭，這可能導致小（xiǎo）鼠（shǔ）死亡。在首次（cì）學習（xí）如何插管時（shí），最重要的是使用頸部後方的手指來調（diào）整頭部角度，以使氣管開口的可視（shì）化。如果操作正確，對舌頭進行（háng）足夠的牽拉（lā），很容易看到（dào）聲帶。最初的（de）可視化步驟通常需要最多的時間，因為一旦看到氣管開口（kǒu），插入纖維電纜（lǎn）和靜脈導管就相對簡單（dān）了。

總之，本文描述的插管方（fāng）法製作成本低，使用簡單，可以令大多數研究人員和實驗室技術人員在相對較少的經驗下快速（sù）掌握小鼠（shǔ）插管技術。